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医用離心機“肾单层细胞培养”案例

蜀科医用離心機系列产品包含高速離心機,低速離心機,大容量離心機,冷冻離心機等,广泛应用于制药、临床医学、血站血库、检验检疫、疾控等科研和生产单位。

下面简单介绍通过医用離心機进行“肾单层细胞培养”的一般操作技术。

1.取腎:用無菌操作取出斷乳前後幼齡動物的腎髒置滅菌平皿中,剪去留的被膜和脂肪,並縱向切成兩半,剪去腎的被膜和脂肪,並縱向切成兩半,剪去腎盂及髓質部分,用含雙抗(指青、鏈黴素,下同)的漢克氏液洗淨,移置小燒杯中,剪成乳糜狀,再用漢克氏液洗2—3次,至液體澄清無血細胞爲止。

2.消化;加入10倍的0.125%胰酶液进行消化。有热消化法(在37℃水浴中)和冷消化法(在4℃冰箱中)两种。消化的时间根据不同的组织细胞和所用胰酶的活性而定,直至聚成絮状的肾组织又分散开。取出倾去胰酶,用汉克氏液洗涤数次,然后加入少量乳汉液,用吸管进行吹打(即吸入和吹出)10-20次,使组织分散为细胞。将分散的细胞经2—3层消毒纱布过滤,取滤液置于医用離心機中以1500转/分离心十分钟,弃去上清液,加适昆乳汉液混匀,再次通过離心機离心,最后加入乳汉液使细胞悬浮其中,收集于灭菌三角瓶中。

3.細胞計數和分裝:取已制好的細胞懸浮液,用計數白細胞的方法計數,根據計數結果,用營養液(pH6.8—7.0)稀釋爲每毫升含50-60萬細胞,分裝于小扁瓶中(容量約50毫升的扁瓶加懸液約5毫升),也可分裝在鏈黴素小瓶中。

5.接毒;将病料剪碎,按1:4加含双抗的汉克氏液研磨成乳糜状,经冻融处理使细胞破碎,病毒充分释放,用離心機,将转速控制在3000转/分左右离心15分钟,将上清液接种到已生长单层细胞的培养瓶中,在37℃温箱中吸附30-60分钟,然后加入维持液继续培养。

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